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倉鼠胰腺癌原位模型的建立及生物學特性
【關鍵詞】 ,胰腺腫瘤Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic characteristics
【Abstract】AIM: To establish an orthotopic model of hamster pancreatic cancer and to analyze its biologic characteristics. METHODS: Pancreatic cancer cell line pDHAM1 of hamster was inoculated under pancreatic membrane. At 7th, 14th, 21st, and 28th day, a group of 10 animals were sacrificed to observe the growth of orthotopic cancer, lymph nodes metastasis, liver metastasis and the quantity and quality of ascites. RESULTS: Orthotopic model of hamster pancreatic cancer had a high survival rate (95%) and grew rapidly. The orthotopic tumors were measured (16±6), (173±44), (369±87), (974±226) mm3 respectively at the 7th, 14th, 21st and 28th day. At the 21st day, cancer cells were observed in lymphatic capillaries and metastasis in some lymph nodes and hydremic ascites was detected. At the 28th day, the positivity rate of lymph nodes and the amount of bloody ascites increased. Liver metastasis was detected in some of the hamsters. CONCLUSION: The establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer cells pGHAM1 is simple and easily copied, and maintains the biologic characteristics of pancreatic carcinoma, which is an ideal research model of pancreatic carcinoma.
【Keywords】 pancreatic neoplasms; disease models, animal; mesocricetus
【摘要】目的： 建立倉鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學特性. 方法： 將倉鼠胰腺癌細胞株pGHAM1接種于倉鼠胰腺背膜下，分別于第7, 14, 21, 28日各剖殺10只，肉眼及光學顯微鏡下觀察原位腫瘤的生長、淋巴結轉移及肝轉移，同時觀測腹水量. 結果： 倉鼠胰腺癌原位模型成活率達95%，生長迅速. 接種后第7， 14， 21， 28日原位腫瘤大小分別為（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） mm3. 第21日，毛細淋巴管內可見癌細胞團，部分淋巴結有癌細胞轉移，可見少量淡血性腹水. 第28日，淋巴結陽性率進一步增加，可見血性腹水，量明顯增多；部分倉鼠發生了肝轉移. 結論： 倉鼠胰腺癌細胞株 pGHAM1原位模型建立方法簡便，易復制，而且腫瘤保持了胰腺癌的生物學特性，是理想的胰腺癌研究模型.
【關鍵詞】 胰腺腫瘤；疾病模型，動物；金倉鼠
0引言
胰腺癌是一種惡性程度高、預后極差的腫瘤［1］. 其原因是胰腺癌發病隱匿，很難早期診斷，而即便早期診斷，部分患者也已經發生肝臟轉移、腹膜播散或者局部復發［2］. 基于為胰腺癌研究提供一個腫瘤的試驗系統目的，已有大量胰腺癌動物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在腫瘤研究方面，由于裸鼠沒有正常的免疫系統，其發病機制可能與人有所不同［3］. 而敘利亞金色倉鼠在形態學、生物學以及免疫學等方面與人相似. 我們擬建立倉鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學特性.
1材料和方法
1.1材料
雌性敘利亞金黃倉鼠40只，4～5周齡，純近交系，體質量40～50 g，購自中國蘭州生物制品研究所. 飼養條件：溫度（22±3）℃，相對濕度為（40±5）%，光/暗周期為12 h/12 h，按照標準食物喂養，自由飲水；DMEM培養液為Gibcol BRL產品；胎牛血清購自杭州四季青生物工程公司.
1.2方法
1.2.1倉鼠胰腺癌細胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺誘導敘利亞金黃色倉鼠胰腺導管癌［4］. 腫瘤組織用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套針植入倉鼠肩胛區皮下，6～8 wk后處死動物，切除腫瘤自治后反復繼代種植，第8次種植后切除腫瘤組織，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37℃下EDTA處理10 min, 1000 r/min離心10 min，收集細胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培養液中培養，并加 100 U/L青霉素鏈霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L兩性霉素B，反復傳代培養60代，建立pGHAM1細胞株.
1.2.2倉鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1細胞株于DMEM培養液中穩定傳代5~6代. 觀察細胞增殖旺盛時終止培養，用無血清DMEM培養液制備細胞懸液，調整細胞密度至1×1010/L，備用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥鈉，取腹部正中切口，牽出胰腺，于脾門較寬大處胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1細胞懸液后常規關腹. 于術后7, 14, 21, 28 d分別剖殺10只. 切除原位腫瘤，用測徑器測量腫瘤大小，按公式V=π/6×長×寬×高計算腫瘤體積，同時觀察腹水的質與量、有無淋巴結、大網膜、壁層腹膜及肝臟轉移.
1.2.3病理學檢查切除大網膜，平鋪在蠟片上，“卷席法”處理大網膜標本；40/L甲醛固定原位腫瘤、壁層腹膜、肝臟及可疑淋巴結，石蠟包埋切片，HE染色，光學顯微鏡觀察.
2結果
2.1原位腫瘤及轉移情況接種后第7日，可見胰內原發灶大小（16±6） mm3,
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