- 相關(guān)推薦
葛根芩連湯上清液與沉淀中異黃酮類成分指紋圖譜的研究
作者：譚曉梅閆琰羅佳波張瑋【關(guān)鍵詞】葛根芩連湯；,,指紋圖譜；,,上清液；,,沉淀
摘要：目的通過(guò)應(yīng)用三維高效液相色譜，建立葛根芩連湯上清液和沉淀中異黃酮指紋圖譜的方法，明確其上清液和沉淀中異黃酮類成分的異同，以便進(jìn)一步探討該方的配伍規(guī)律。方法葛根素、大豆苷元用甲醇溶解制成對(duì)照品溶液，葛根藥材水煎液、葛根芩連湯上清液、沉淀用二甲基亞砜溶解制成供試品溶液，采用三維高效液相譜對(duì)葛根芩連制劑進(jìn)行指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究，流動(dòng)相為甲醇水乙腈梯度洗脫，掃描波長(zhǎng)為200～400nm。結(jié)果在梯度洗脫條件下，葛根芩連湯上清液的HPLC指紋圖譜中有6個(gè)標(biāo)識(shí)性共有峰，葛根芩連湯沉淀的HPLC指紋圖譜中有4個(gè)標(biāo)識(shí)性共有峰。但峰面積僅占上清液的8%（以葛根素計(jì)）。結(jié)論葛根芩連湯配伍產(chǎn)生的沉淀中亦有異黃酮類有效部位，但與上清液比較，含量較低。說(shuō)明君藥葛根中異黃酮類成分與方劑中的其他物質(zhì)絡(luò)合而產(chǎn)生沉淀，且該沉淀溶于二甲基亞砜。
關(guān)鍵詞：葛根芩連湯；指紋圖譜；上清液；沉淀
葛根芩連湯原載于東漢張仲景《傷寒論》中，由葛根、黃芩、黃連、炙甘草4味中藥組成。其處方為：葛根15g，黃芩9g，黃連9g，甘草(炙)6g。其中葛根為君藥，黃芩、黃連為臣藥，炙甘草為使藥。功效主要是表里雙解，清熱止痢。中藥配伍在煎煮過(guò)程中，其成分發(fā)生復(fù)雜的變化，其中沉淀反應(yīng)是中藥配伍共煎時(shí)常見(jiàn)的變化。日本學(xué)者于1978年首次報(bào)道黃連配伍甘草、大黃時(shí)小檗堿等生物堿在煎劑中的含量大幅度下降［1］。其沉淀能溶于二甲基亞砜，部分溶于吡啶、稀酸、稀堿，微溶于冷甲醇、乙醇，不溶于氯仿、石油醚、在熱甲醇中能不斷溶解，冷后又生成沉淀［2］。沉淀使煎液中有效成分的含量降低，且有研究表明，黃連黃芩配伍產(chǎn)生的沉淀，能夠在胃腸內(nèi)溶解［3］，但葛根芩連湯配伍后究竟是哪些成分發(fā)生沉淀反應(yīng)，目前尚未有明確的結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)試圖通過(guò)指紋圖譜的方法，探明其上清液與沉淀中異黃酮成分的異同，以明確沉淀物中是否有異黃酮類成分。
1儀器與試藥
美國(guó)惠普HP1100高效液相色譜儀，G1315A紫外可見(jiàn)光二級(jí)管陣列檢測(cè)器，離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），甲醇(分析純，天津大茂學(xué)試劑廠)、甲醇（色譜純，MERCK)，乙腈(色譜純)，葛根素對(duì)照品753200007、大豆苷元對(duì)照品1502200101(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；葛根、黃芩、黃連、甘草藥材由廣東省致信藥材公司提供,經(jīng)本校中藥鑒定教研室劉傳明講師鑒定,分別為豆科植物野葛PuerarialobataOhwi,唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi干燥根莖,毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.干燥根莖,豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.干燥根莖(蜜炙)。
2方法
2.1葛根芩連湯標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶劑的制備葛根15g，黃芩9g，黃連9g，甘草6g，燒杯中加水400ml,先煎葛根20min,余藥共煎30min,煎兩次,趁熱120目濾布濾過(guò),合并濾液。90℃定容至1000ml,靜置室溫后，于冰箱4℃內(nèi)靜置24h，取出，離心以3000r/min，得到上清液，定容到1000ml，為供試品溶液1；沉淀于烘箱內(nèi)50℃干燥24h后，加適量二甲基亞砜使溶解，定容到1000ml，過(guò)濾，得供試品溶液2。
2.2色譜條件甲醇∶水∶乙腈梯度洗脫［4，5］檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。結(jié)果見(jiàn)表1。依據(jù)DAD檢測(cè)的三維圖譜,選擇可將全譜物質(zhì)均能檢測(cè)到的250nm作為最后的檢測(cè)波長(zhǎng)(圖1～3)。
表1梯度洗脫條件（略）
圖1葛根藥材水煎液（略）
圖2葛根全方上清液（略）
圖3葛根芩連全方沉淀（略）
2.3對(duì)照溶液的制備
2.3.1對(duì)照藥材溶液的制備取葛根藥材15.09g，水煎煮2次，煎煮時(shí)間分別為30，20min，濾過(guò)，煎煮液定容到1000ml，即得。
2.3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取葛根素、大豆苷元各5mg，于50ml容量瓶中，加甲醇溶解后定容至刻度，即得。 論文網(wǎng)在線
2.4樣品測(cè)定精密吸取各溶液10μl，注入高效液相色譜儀（HPLC）中，參照高效液相色譜法，結(jié)合指紋圖譜的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以對(duì)照藥材為參照色譜，測(cè)定并記錄色譜圖，以中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版采用多點(diǎn)校正的方法進(jìn)行計(jì)算分析。
2.5對(duì)照實(shí)驗(yàn)吸取對(duì)照品溶液10μl，注入HPLC，得知21.5min左右的峰為葛根素，40min左右為大豆苷元。
【葛根芩連湯上清液與沉淀中異黃酮類成分指紋圖譜的研究】相關(guān)文章：
中藥指紋圖譜在質(zhì)量評(píng)價(jià)中的作用概述04-13
羅布麻葉頂空氣相色譜—質(zhì)譜指紋圖譜的研究03-26
指紋識(shí)別算法研究03-08
探析不同品種葛根中葛根素及總黃酮的含量測(cè)定03-19
指紋預(yù)處理算法與實(shí)現(xiàn)的研究03-07
源語(yǔ)中的“異”與譯語(yǔ)中的“達(dá)”03-11
淺談?wù)搱D譜在音樂(lè)活動(dòng)中的運(yùn)用論文11-30
研究泥胡菜的化學(xué)成分03-18