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單純皰疹病毒2型糖蛋白G的基因擴(kuò)增、克隆及其B細(xì)胞抗原表位分析
【關(guān)鍵詞】 單純皰疹病毒2型；包膜糖蛋白G
Gene cloning and B cell antigen epitope analysis of HSV2 glycoprotein G
【Abstract】 AIM: To clone fulllength glycoprotein G (gG2) gene of herpes simplex virus type Ⅱ(HSV2) and make a forecast to B cell antigen epitope of gG2. METHODS: The gG2 gene of HSV2 amplified by PCR was ed into pGEMT carrier, then transected into E.coli DH5α cells for sequencing. Then, B cell antigen epitope was analyzed by Lasergene, Clustal X softwares. RESULTS: We have cloned fulllength gG2 gene of HSV2. By making an analysis to B cell epitope of gG2, we found that the homology in Nterminal of gG1 and gG2 genes of HSV was very low. B cell antigen epitope of gG2 of HSV2 showed a very high antigen index in "peculiarity domain". CONCLUSION: The successful cloning of fulllength gG2 of HSV2 and a successful forecast to B cell epitope of gG2 provide evidences and references for developing diagnostic kits for herpes virus infection and finding better target sites of HSV2 vaccine.
【Keywords】 herpes simplex virus type Ⅱ; glycoprotein G2; genes cloning; epitope
【摘要】 目的：克隆單純皰疹病毒2型（HSV2）糖蛋白G2(gG2)全長(zhǎng)基因并對(duì)糖蛋白G2進(jìn)行B細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè). 方法：用PCR法擴(kuò)增HSV2的gG2基因，連接到pGEMT載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α株后測(cè)序. 利用Lasergene，Clustal X等軟件，進(jìn)行B細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè). 結(jié)果：完成單純皰疹病毒2型（HSV2）gG2全長(zhǎng)基因克隆. 通過(guò)B細(xì)胞抗原表位分析，發(fā)現(xiàn)HSV1的gG1和HSV2的gG2氨基端的同源性很低. gG2蛋白在“獨(dú)特區(qū)”存在抗原指數(shù)非常強(qiáng)的抗原表位. 結(jié)論：成功構(gòu)建單純皰疹病毒2型（HSV2）gG2全長(zhǎng)基因克隆，為單純皰疹病毒感染的診斷試劑的研發(fā)及抗單純皰疹病毒疫苗研究尋找更好的靶位點(diǎn)提供研究材料和參考.
【關(guān)鍵詞】 單純皰疹病毒2型；包膜糖蛋白G2；基因克隆；抗原表位
0引言
單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）是引起人類病毒性疾病中常見(jiàn)的病毒之一，可分為HSV1和HSV2兩種血清型. HSV2型主要感染外生殖器和軀干下部皮膚，引起生殖器皰疹、新生兒皰疹. 目前認(rèn)為與生殖器惡性腫瘤相關(guān)，并增加了AIDS的感染機(jī)會(huì)［1］. HSV2病毒顆粒中至少有11種包膜糖蛋白，其中g(shù)G2為型特異性抗原［2］，在單純皰疹2型病毒診斷、分型和疫苗研究中起到重要作用. 我們對(duì)HSV2 的gG2基因進(jìn)行克隆，并利用生物信息學(xué)軟件對(duì)gG2基因進(jìn)行B細(xì)胞抗原表位分析，為gG2蛋白作為診斷試劑和疫苗研究打下基礎(chǔ).
1材料和方法
1.1材料HSV2病毒株由本課題組在廣東地區(qū)單純皰疹感染患者中分離培養(yǎng)并感染于Vero細(xì)胞中保存，Vero細(xì)胞、DH5α細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存. DNAzsolE， DNA純化試劑盒購(gòu)自申能博采公司，ExTaq酶、dNTP購(gòu)自TaKaRa公司，pGEMT載體購(gòu)自Promega公司.
1.2方法
1.2.1引物設(shè)計(jì)根據(jù)GenBank提供的HSV2病毒（Genbank access number: Z86009）基因組全序列，利用LasergenePrimerSelect軟件設(shè)計(jì)引物. 上游的引物序列是5′AAGCTTACCTTGCCGCCCGGCGTCA3′；下游的引物序列是5′GCGGCCGCTTATCGTGGACATTTGGTCG3′. 引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成.
1.2.2DNA提取采用DNAzsolE從HSV2病毒Vero細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取DNA.
1.2.3gG2基因的擴(kuò)增使用TaKaRa公司ExTaq酶進(jìn)行PCR. 反應(yīng)液包括：2.5 mmol的dNTPs 3 μL，10×PCR buffer 3 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，ExTaq 0.5 μL，cDNA模板5 μL，H2O 16.5 μL，總體積30 μL. 反應(yīng)條件：94℃，2 min；94℃，30 s，55℃，1 min，72℃，2 min，30個(gè)循環(huán)；72℃ 8 min，4℃保存.
1.2.4基因克隆使用申能博采公司DNA純化試劑盒回收PCR產(chǎn)物，將回收產(chǎn)物與pGEMT載體連接， 4℃放置12 h. 將重組載體轉(zhuǎn)化DH5α感受
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