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蒲公英多糖體外抑瘤和抗突變作用研究
蒲公英是中醫臨床常用的一種中草藥，下面是小編搜集整理的一篇關于蒲公英多糖體外抑瘤作用研究的論文范文，供閱讀參考。
【摘要】目的觀察蒲公英多糖對肝癌細胞的抑制和抗突變作用。方法采用MTT法測定蒲公英多糖對肝癌細胞的抑制作用，用微核實驗檢測抗突變作用。結果蒲公英多糖隨濃度的增加對肝癌細胞的抑制率增加，但不明顯;可以顯著提高外周血細胞免疫力，拮抗由環磷酰胺誘發的微核突變(P<0.01)。結論蒲公英多糖對肝癌細胞的抑制作用不明顯;能有效地拮抗環磷酰胺誘發的微核突變。
【關鍵詞】 蒲公英多糖 抑瘤 微核突變
蒲公英Taraxacum L.是中醫臨床常用的中草藥,具有清熱解毒、消腫散結、利尿通淋、健胃消炎、保肝利膽等功效[1]。研究發現，蒲公英有抗菌[2]、抗突變[3]、抑瘤[4]、抗氧化[5]等多種藥理作用，并能提高機體免疫性，對抗環磷酰胺引發的DNA損傷[6]。蒲公英根部富含多糖[7]，研究發現多糖具有廣泛的藥理作用，其中多糖誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖是目前研究的熱點;同時外界環境誘發的突變是腫瘤細胞形成的重要因素之一。本文就蒲公英多糖對肝癌細胞的抑制以及對環磷酰胺誘發的突變的拮抗作用進行了研究。
1、材料與儀器
1.1 試劑PMI1640，美國GIBCO產品;胎牛血清，杭州四季青生物工程材料研究所產品;環磷酰胺(CP)，上海華聯制藥公司產品;噻唑蘭(MTT)，Sigma公司產品;植物血凝素(PHA)，金爾康動物藥業有限公司;DMSO，北京索萊寶科技有限公司產品;Giemsa， Sigma公司產品。
1.2 材料東北蒲公英T.ohwianum Kitag.采自黑龍江省五大連池自然風景區。蒲公英多糖的制備參照文獻[8]法進行。肝癌細胞Bel-7402和正常人外周血淋巴細胞均由齊齊哈爾醫學院饋贈。
1.3 儀器KHB全自動酶標儀(ST-360)，北京桑翌實驗儀器研究所產品;細胞培養箱，河北省虹宇儀器設備有限公司產品;96孔板，Greiner公司產品;超凈工作臺，ESCO公司產品。
2、方法
2.1 MTT法[9]檢測蒲公英多糖對肝癌細胞Bel-7402的抑制作用運用改良的MTT實驗[9]計算蒲公英多糖對腫瘤的抑制作用，蒲公英多糖的終濃度為25，50，100，200，400，800，1 600，3 200 μg/ml。陽性對照加CP，終濃度為260 μg/ml;每個濃度均設6個平行孔。酶標儀的吸收波長采用570nm。
抑制率(IR)=(空白對照組OD值-多糖組OD值)/空白對照組OD值。采用SPSS數據包進行方差分析。
2.2 微核實驗檢測蒲公英多糖拮抗環磷酰胺誘發的微核突變常規采人外周血與培養[10]。細胞培養24 h后，將蒲公英多糖用PBS溶液配成溶液，微孔濾膜過濾(0.2 μm)。將多糖溶液加到培養瓶內，使多糖濃度分別為50，200，800，3 200 μg/ml。繼續培養24 h后，向每瓶內加入25 ml CP，使CP濃度達到100 μg/ml。另設空白對照組和CP陽性對照組，空白對照組加PBS不加CP，CP陽性對照組加CP不加多糖。制片采用文獻[10]法進行。
統計：觀察計數1 000個可計數轉化細胞的微核(MN)數，計算千分率(MN‰)。用SPSS軟件包分析各組數據。抑制率(%)=(陽性組MN數-實驗組MN數)×100/陽性組MN數。
3、結果
3.1 蒲公英多糖體外抑瘤作用蒲公英多糖對肝癌細胞Bel-7402的細胞毒作用見表1。結果顯示，隨著蒲公英多糖濃度的增大，對腫瘤細胞的抑制作用也在增大，即蒲公英多糖對腫瘤細胞的抑制作用存在量依賴關系。但是即使在很大的濃度下(3 200 μg/ml)，多糖對腫瘤細胞的抑制率僅為27.94%，而此時蒲公英多糖溶液中已出現很少量的不溶解的多糖，因此，多糖的實際濃度未能達到實驗設計的水平。而CP在較低濃度(260 μg/ml)下對腫瘤細胞的抑制作用就已經很顯著了(IR>30%)。一般認為，只有當抑制率達到30%以上才說明腫瘤細胞對藥物敏感[11]，蒲公英多糖對腫瘤細胞的最大抑制率小于30%，故認為蒲公英多糖對肝癌細胞Bel-7402沒有明顯的抑制作用。表1 蒲公英多糖對Bel-7407的抑制作用(略)
3.2 蒲公英多糖拮抗CP誘發的微核突變CP是一種烷化劑，是臨床常用的免疫抑制劑，能夠抑制細胞的增殖，常做抗癌藥物;同時它對正常細胞DNA的合成及分裂具有強烈的抑制作用，從而明顯誘發微核產生。由表2可知，陽性對照組(CP組)與空白對照組的微核率相差極為顯著(P<0.01)。蒲公英多糖對CP誘發的微核突變有明顯的抑制作用，細胞微核率與CP對照組相比差異極顯著(P<0.01)，并且實驗各組的抑制作用呈劑量效應。由此可見，蒲公英多糖對CP誘發的外周血淋巴細胞微核突變有很顯著的拮抗作用，說明蒲公英多糖對遺傳物質具有保護作用，即抗突變作用。表2 蒲公英多糖對CP誘發微核的拮抗作用(略)
4、討論
本實驗表明，蒲公英多糖對腫瘤細胞的抑制作用存在著劑量效應，但是抑制作用不明顯。抑制作用不明顯可能是由于以下幾種原因：①應用體外細胞培養進行抗腫瘤藥物的篩選有周期短、結果顯而易見的優點，但是也存在著一定的局限性，主要表現在：假陰性結果導致有效藥物的漏篩。有些藥物如生物反應調節劑需要通過機體的反應才能對細胞起作用，有些藥物必須經過體內酶的代謝活化才能變成活性成分，此類藥物在進行體外篩選時就會產生假陰性結果，從而導致有效藥物的漏選，因此，體外試驗的結果必須通過體內試驗進一步驗證。②本實驗所用蒲公英多糖為熱水浸提法獲得，提取過程中采用80℃，這個溫度會不會破壞多糖的生物活性尚未可知;并且所用的多糖為精制粗多糖，沒有經過純化，其中的微量蛋白質等成分可能對細胞的增殖有影響;或者不同分子量的多糖對腫瘤的作用也不相同，它們的相互作用使得蒲公英多糖的抑瘤效果不顯著。③蒲公英多糖的抑瘤作用有可能是通過提高機體免疫功能而發揮作用。
蒲公英多糖可以有效拮抗由環磷酰胺誘發的微核突變，保護DNA不受損傷。雖然蒲公英多糖對腫瘤細胞沒有直接抑制作用，但是也說明了蒲公英多糖對細胞沒有毒害作用，不會對正常細胞產生細胞毒性作用，在臨床上不會由于使用蒲公英多糖而帶來對機體的副作用。可以設想，在臨床上將蒲公英多糖與抑瘤藥物配合使用，既增強了藥物的抑瘤作用，又可以有效保護正常細胞不受損傷，這將在進一步的實驗研究中進行探索。
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