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不同藥用鉤藤中總黃酮的含量變化測(cè)定
鉤藤又叫大鉤丁、雙鉤藤，為茜草科植物鉤藤或華鉤藤及其同屬多種植物的帶鉤枝條;質(zhì)硬，莖斷面有黃白色髓部。下面是小編搜集的一篇關(guān)于藥用鉤藤總黃酮的含量變化研究的論文范文，歡迎閱讀借鑒。
藥用鉤藤有五個(gè)種，分布在貴州省內(nèi)的主要是毛鉤藤和鉤藤居多，在臨床上通常用于降血壓。因黃酮類成分具有一定降壓作用，本實(shí)驗(yàn)采用紫外—可見分光光度法，三氯化鋁顯色后于 425 nm 波長處測(cè)定吸光度[1]，考察研究不同采收期、不同產(chǎn)地和不同種的藥用鉤藤中總黃酮的含量變化，為今后對(duì)鉤藤的深入研究提供依據(jù)。
1、材料與儀器
紫外—可見分光光度計(jì)( 島津 UV - 2501PC) ; AE - 240雙量程電子分析天平，量程: 萬分之一和十萬分之一兩檔( 梅特勒 - 托利多上海有限公司) ; 超聲波清洗器; 蘆丁對(duì)照品( 批號(hào): 100080 -200707) ，購于中國藥品生物制品檢定所; 無水乙醇、三氯化鋁均為分析純，水為蒸餾水。藥材樣品采自貴州省開陽縣翁昭村鉤藤種植基地毛鉤藤和貴州省劍河縣鉤藤種植基地鉤藤，樣品藥材均為人工種植五年或五年以上。經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院講師付志明、副教授魏升華鑒定為茜草科植物毛鉤藤( Uncaria hirsute Havil) ，鉤藤( Uncaria rhyn-chophylla ( Miq. ) Miq. ex Havil. ) ，藥材樣品在室內(nèi)陰干經(jīng)粉碎后于 45℃烘至恒重并置于干燥器中備用。
2、方法與結(jié)果
2. 1 溶液的制備
2. 1. 1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品 3. 04 mg，置于 50 ml 量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為 60. 80 μg/ml 的對(duì)照品溶液。
2. 1. 2 三氯化鋁溶液的制備 精密稱取三氯化鋁 12. 0717g，置于 500 ml 量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為 0. 10 mol/L 的三氯化鋁溶液，備用。
2. 1. 3 供試品溶液的制備 取鉤藤粉末 1 g，精密稱定，置于 50 ml 具塞的錐形瓶中，精密加入無水乙醇 20 ml，稱定重量，超聲( 功率為 60%) 提取 30 min，取出，放冷，用提取液補(bǔ)足減失的重量，過濾，精密量取續(xù)濾液 2 ml，置 10 ml 容量瓶中，精密加入濃度為 0. 10 mol/L 的三氯化鋁溶液 1 ml，混勻，加無水乙醇至刻度，搖勻，靜置 15 min，即得供試品溶液。
2. 2 檢測(cè)波長的確定
取供試品溶液和對(duì)照品溶液，按 2. 1. 3“供試品溶液的制備”項(xiàng)，從“精密加入濃度為0. 10 mol/L 的三氯化鋁溶液1ml”起同法操作，進(jìn)行顯色，且同法作試劑空白，用紫外—可見分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，分別根據(jù)其光譜圖知: 樣品及對(duì)照品在 425 nm 處均有最大吸收峰，故本實(shí)驗(yàn)選擇 425 nm 作為鉤藤總黃酮的測(cè)定波長。
2. 3 線性關(guān)系考察
精密吸取濃度為 60. 80 μg/ml 的蘆丁對(duì)照品溶液 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、4. 0 ml，分別置于 7 個(gè) 10 ml 的容量瓶中，各精密加入濃度為 0. 10 mol/L 三氯化鋁溶液 1 ml，并加無水乙醇至刻度，搖勻，靜置 15 min，同法作試劑空白，用紫外—可見分光光度計(jì)在 425 nm 的波長處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品的濃度( μg/ml) 為橫坐標(biāo)( X) ，吸光度為縱坐標(biāo)( Y) 進(jìn)行回歸計(jì)算，得到總黃酮的回歸方程為: Y = 0. 0392X +0. 0104，r = 0. 9998。結(jié)果表明總黃酮在 3. 04 ～ 24. 32 μg / ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2. 4 精密度試驗(yàn)
精密吸取濃度為 60. 80 μg/ml 的蘆丁對(duì)照品溶液 2 ml，按 2. 1. 3“供試品溶液的制備”項(xiàng)，從“精密加入濃度為 0. 10mol / L 的三氯化鋁溶液 1 ml”起同法操作，顯色后，分別進(jìn)行吸光度測(cè)定，以 6 次測(cè)得的吸光度計(jì)算 RSD 為 2. 59%，表明儀器精密度良好。
2. 5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取按“2. 1. 3”項(xiàng)下制備的供試品溶液，分別在 0、30、45、60、75、90 min 進(jìn)行吸光度測(cè)定，以測(cè)得的吸光度計(jì)算RSD 為 2. 98% ，表明供試品溶液在 90 min 內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2. 6 重復(fù)性試驗(yàn)
取 6 份 2012 年 3 月采收開陽翁昭人工種植毛鉤藤樣品粉末，每份 1 g，精密稱定，分別置于 6 個(gè) 50 ml 具塞錐形瓶中，按“2. 1. 3”項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備供試液，同法作試劑空白，用紫外—可見分光光度計(jì)在 425 nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算出該鉤藤藥材中總黃酮( 按蘆丁計(jì)) 的平均含量為 0. 08%，RSD 為 2. 95%。
2. 7 加樣回收率試驗(yàn)
稱取已知總黃酮( 按蘆丁計(jì)) 的平均含量為 0. 08%的鉤藤粉末6 份，每份0. 5 g，精密稱定，分別置于50 ml 具塞錐形瓶中，每份分別精密加入濃度為 20. 00 μg/ml 的蘆丁對(duì)照品溶液 20. 0 ml，按“2. 1. 3”項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備供試液，同法作試劑空白，用紫外—可見分光光度計(jì)在 425 nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算出總黃酮的平均回收率為100. 75% ，RSD 為 2. 94% ，表明本法能夠準(zhǔn)確的測(cè)定中藥鉤藤中總黃酮的含量。結(jié)果見表 1。
2. 8 樣品含量測(cè)定
按“2. 1. 3”項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備各供試液，每樣平行 3 份，同法作試劑空白，用紫外—可見分光光度計(jì)在 425 nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算出總黃酮( 按蘆丁計(jì)) 的含量，結(jié)果見表 2。
3、討 論
根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)看出，開陽毛鉤藤在深秋至初春氣溫相對(duì)較低時(shí)鉤藤中總黃酮含量相對(duì)較高且含量較穩(wěn)定，而氣溫較高的 8、9 月份時(shí)鉤藤中的黃酮含量相對(duì)較低，這與鉤藤中生物堿含量隨氣溫變化存在相似規(guī)律( 鉤藤中生物堿含量隨氣溫變化研究已另文報(bào)道) 。開陽毛鉤藤和劍河鉤藤雖不同種且產(chǎn)地不同，但兩者總黃酮含量卻沒有較大差異。
本實(shí)驗(yàn)在考察提取溶劑時(shí)，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道及黃酮類物質(zhì)的性質(zhì)，分別考察了不同濃度的乙醇[3，4]、先用乙醇提取再用乙酸乙酯萃取、甲醇及無水乙醇作為提取溶劑，只有無水乙醇提取出的供試液顯色后在與蘆丁對(duì)照品顯色后在相同波長下有最大吸收峰，所以提取溶劑優(yōu)選為無水乙醇。
參考文獻(xiàn)
[1] 辛文波，王崢濤. 毛鉤藤葉的化學(xué)成分[J]. 中國天然藥物，2008，6( 4) :262 -264.
[2] 伍俊妍，李國成，王定勇. 大葉鉤藤非生物堿部分的化學(xué)成分研究[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27( 2) : 226- 227.
[3] 鄭嘉寧，王定勇. 大葉鉤藤生物堿類化學(xué)成分研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，15( 1) :80 -86.
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