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肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機制和預(yù)防
畢業(yè)論文肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機制和預(yù)防
周少麗 黑子清
中山大學(xué)附屬3院麻醉科
缺血再灌注損傷是由1960年Jennings首先提出的,是指組織器
官缺血后再灌注,不僅不能使組織器官功能恢復(fù),反而加重組織器官
的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷.缺血再灌注損傷在許多重要器官包括心,肝,
肺,腎,胃腸道等均可發(fā)生.肝臟缺血再灌注損傷(HIRI)是肝臟外
科手術(shù)中常見的病理過程,多見于休克,需要阻斷肝臟血流的肝外科
手術(shù)以及肝移植術(shù)等病理生理過程中.其發(fā)生的病理生理機制復(fù)雜,
有諸多因素參與其中,形成相互制約和相互促進(jìn)的關(guān)系.包括炎性細(xì)
胞浸潤和血小板聚集,反應(yīng)性氧中間物(ROI)的產(chǎn)生和釋放,各種
炎性介質(zhì)(如黏附分子和白3烯)和血管活性物(如1氧化氮和內(nèi)皮
素等產(chǎn)生有關(guān))[1].
1 肝臟缺血-再灌注損傷的發(fā)生機制
1 反應(yīng)性氧中間物(ROI)的產(chǎn)生和釋放:
肝臟缺氧期間大量堆積的ATP代謝產(chǎn)物次黃嘌呤和氧發(fā)生反應(yīng).
產(chǎn)生ROI(如過氧化物和高活性的羥基物).由于ROI在結(jié)構(gòu)上即其
外軌道上有1個或多個不配對電子特點,因而使ROI具有高度活性
和潛在的毒性.肝臟缺血缺氧期間產(chǎn)生的ROI可以通過以下幾個機
制損傷細(xì)胞:①選擇性地?fù)p傷相鄰分子如脂質(zhì),蛋白質(zhì)和核酸;②增
加信號傳遞,使嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生趨化性和被激活;③與NO反應(yīng)產(chǎn)
生高度毒性的過氧化物[2].大量的動物實驗和臨床病例證明ROI不僅
在再灌注期間明顯增加,且可持續(xù)24h以上,其產(chǎn)生的量與再灌注損
傷呈正相關(guān).
2 炎性細(xì)胞的聚集
在缺血再灌注損傷的組織中有中性粒細(xì)胞在損傷區(qū)域大量聚集
和黏附,其聚集和黏附能力與白3烯B4(TB4),血小板活化因子(platelet
activating factor, PAF),腫瘤壞死因子(α-tumor necrosis, TNF-α),白
介素1(IL-1)等表達(dá)有關(guān)[3-4].聚集和黏附的中性粒細(xì)胞可通過以下機
制損傷組織器官:①聚集和黏附的中性粒細(xì)胞通過激活煙酰胺腺嘌呤
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2核苷酸磷酸氧化酶(彈力酶,蛋白酶和膠原酶)釋放增加蛋白溶解
酶降解細(xì)胞外網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的所有成分,破壞完整細(xì)胞和使免疫球蛋白,
補體和凝血因子失去活性;②中性粒細(xì)胞釋放的彈力酶與ROI可以
相互作用,ROI通過蛋氨酸氧化使彈力酶的抑制劑21-抗胰蛋白酶
失活;③另外ROI又可以由GMP-140等黏附分子調(diào)節(jié)后,促使粒細(xì)
胞黏附于微血管內(nèi)皮.因此,肝臟缺血再灌注損傷時,粒細(xì)胞,內(nèi)皮
細(xì)胞黏附和ROI之間的相互作用加重了組織結(jié)構(gòu)的損傷.
3 血管活性物質(zhì)和缺血再灌注損傷
3.1 1氧化氮:1氧化氮(NO)是能夠使粒細(xì)胞發(fā)生黏附作用的重
要介質(zhì),是由L-精氨酸通過NO合成酶合成的,其突出的作用是松
弛血管平滑肌和抑制血小板聚集[5-7].NO可通過以下作用機制參與肝
臟的缺血再灌注損傷:①NO可與ROI競爭過氧化物歧化酶的介質(zhì),
形成過氧化氮物,引起血管收縮,形成再灌注損傷中竇狀隙血流停滯
和無再流的現(xiàn)象;②NO還可通過繼發(fā)性介質(zhì)cGMP引起血管擴張,
最終引起微循環(huán)的淤滯和再灌注損傷.
3.2 內(nèi)皮素:內(nèi)皮素屬于血管活性肽族,可以分為ET-1,ET-2,ET-3
3種,其中ET-1是最重要的血管收縮劑,可引起全身動脈和靜脈系
統(tǒng)血管收縮.大量的實驗證明,ET-1會導(dǎo)致肝臟竇狀隙收縮,血流
減少,引起再灌注損傷中的無再流現(xiàn)象,且呈劑量依賴型.
3.3 血小板活化因子:血小板活化因子(PAF)是自身有效磷脂,具
有血管活性和炎性介質(zhì)前體的特點,參與再灌注損傷.其作用機理主
要是誘發(fā)血小板聚集和主要炎性細(xì)胞釋放各種蛋白酶和細(xì)胞因子等
介質(zhì).另外ROI能通過增加內(nèi)皮細(xì)胞和血小板對鈣離子(激活的
PLA2)的通透性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞,粒細(xì)胞和血小板釋放PAF.
3.4 白3烯:白3烯(LTB4)是花生4烯酸的代謝物,來源于Kupffer
細(xì)胞[8],通過5-脂肪氧合酶途徑產(chǎn)生.白3烯在缺血再灌注損傷中明
顯升高,參與肝臟缺血-再灌注損傷.另外ROI能通過增加細(xì)胞內(nèi)
的自由鈣激活胞漿膜上的PLA2,而PLA2又能把細(xì)胞膜上的磷脂轉(zhuǎn)化
為花生4烯酸增加白3烯的產(chǎn)物.
4 肝臟里不同細(xì)胞成分參與了肝臟缺血-再灌注損傷
4.1 Kupffer細(xì)胞:已經(jīng)有研究證實,Kupffer細(xì)胞參與缺血-再灌注
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損傷,其具體的作用機理是Kupffer細(xì)胞可以釋放大量的炎性介質(zhì)
(IL-1和IL-8),吸引中性粒細(xì)胞和產(chǎn)生ROI;同時被激活的Kupffer
細(xì)胞能釋放TNF-α,TNF-α能誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞釋放內(nèi)皮素1(ET-1),
共同損傷器官組織[9-11].在病理標(biāo)本上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)域周圍有
明顯缺氧改變,電鏡顯示Kupffer細(xì)胞有許多片層足和偽足.
4.2 星狀細(xì)胞:星狀細(xì)胞位于肝臟Disse間隙內(nèi)皮細(xì)胞,環(huán)繞毛細(xì)血
管,其功能是調(diào)節(jié)肝竇狀隙血流.肝再灌注損傷時,ET-1和P物質(zhì)
等血管活性物質(zhì)可以使星狀細(xì)胞收縮,另外自由基也能激活星狀細(xì)
胞,導(dǎo)致竇狀隙收縮,血流淤積,缺氧和進(jìn)1步釋放炎性介質(zhì),形成
惡性循環(huán),甚至產(chǎn)生原發(fā)性移植肝功能不良(primary graft dysfunction,
PGD)或嚴(yán)重的原發(fā)性移植物無功能(primary nofunction, PNF).
總之,在肝臟缺血和再灌注損傷中,有9大因子起作用,即氧自
由基,細(xì)胞因子,蛋白酶,鈣離子,磷脂酶A,花生4烯酸產(chǎn)物,血
小板激活因子,內(nèi)皮素和內(nèi)毒素等[12].這些因子并非獨立起作用,而
是相互促進(jìn),構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)式或瀑布式樣反應(yīng),使肝臟缺血再灌注損傷機
制尤為復(fù)雜[13-14].結(jié)果是缺血再灌注激活了肝內(nèi)皮細(xì)胞,黏附因子(如
ICAM-1)的表達(dá)上調(diào),炎性因子如TNF-α等大量釋放,導(dǎo)致肝白細(xì)
胞和內(nèi)皮細(xì)胞大量聚集,在激活細(xì)胞因子的作用下供體的免疫源性增
加,甚至使移植物發(fā)生急性排斥反應(yīng);而慢性損傷肝組織在細(xì)胞因子
和黏附因子的階梯式破壞反應(yīng)下,發(fā)生細(xì)小血管的分化,增生和硬化,
發(fā)生慢性排斥反應(yīng)最終導(dǎo)致移植物無功能[15-16].
2 肝臟缺血-再灌注損傷的防治
肝臟缺血-再灌注損傷的預(yù)防可以從多個環(huán)節(jié)入手,包括術(shù)前,
術(shù)中,術(shù)后靜脈用藥和在保存液中加入有效成分等,可以單1或多個
環(huán)節(jié)共同調(diào)節(jié)預(yù)防.
1 自由基清除劑:別嘌呤醇,谷胱甘肽(GSH),維生素E,維生
素C,輔酶Q10等抗氧化劑,可以在氧化反應(yīng)中提供電子給氧自由基,
使氧自由基還原而被清除,減輕肝臟缺血再灌注損傷,可以有效地保
護(hù)細(xì)胞膜和線粒體膜,保護(hù)肝功能.已經(jīng)有實驗證明,谷胱甘肽靜脈
給藥可以作為抗氧化劑阻止大鼠肝臟移植后的缺血再灌注損傷[17].N
-乙酰半胱氨酸(NAC)作為GSH的前體物質(zhì),由于可以提高肝細(xì)
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胞內(nèi)的GSH水平,起到類似GSH保護(hù)肝細(xì)胞膜,減輕肝臟缺血再灌
注損傷后肝功能障礙的作用[18].超氧化物歧化酶(SOD)是機體另外
1種重要的氧自由基清除劑,能夠特異性地清除氧自由基,減少細(xì)胞
凋亡,有效地保護(hù)肝功能.丙酮酸乙酯(EP)能夠通過有效地下調(diào)
炎癥介質(zhì),減少脂質(zhì)過氧化和抑制細(xì)胞凋亡而阻止肝臟缺血再灌注損
傷[19].硫普羅寧作為1種強有力的超氧化物合成抑制劑,已有實驗證
明該藥對大鼠肝臟缺血再灌注損傷后的肝實質(zhì)有顯著的保護(hù)作用[20].
2 鈣通道阻滯劑:細(xì)胞內(nèi)鈣超載是肝臟發(fā)生缺血再灌注損傷的主
要機制之1.因此,通過應(yīng)用鈣拮抗劑可以通過誘導(dǎo)或抑制凋亡相關(guān)
基因的表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡,降低肝組織中丙2醛,血清內(nèi)皮素-1,
腫瘤壞死因子α等水平,對肝臟缺血再灌注損傷有良好的保護(hù)作用.
經(jīng)典的鈣拮抗劑維拉帕米和非選擇性鈣通道拮抗劑嗎多明均能有效
阻止肝臟缺血再灌注損傷.另外,能抑制T型和L型鈣通道的粉防
已堿(tetrandrine, TET)也能減輕大鼠肝臟缺血再灌注的脂質(zhì)過氧化
和中性粒細(xì)胞浸潤[21].
3 蛋白酶抑制劑:如抑肽酶,烏司他丁,甲磺酸加貝酯(GM)等,
可以通過抑制多形粒細(xì)胞聚集,黏附[22],抑制微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧自由
基的釋放,抑制致炎細(xì)胞因子如TNF-α和IL-6等釋放[23],減少細(xì)胞
凋亡的發(fā)生,改善微血管灌注等機制有效地改善肝臟的缺血再灌注損
傷,提高移植肝的存活率[24].
4 中醫(yī)中藥的應(yīng)用:參附注射液(SF)是由中藥人參,附片提取
物組成.其主要有效成份為人參皂甙和烏頭類生物堿.已經(jīng)有大量研
究證實SF對治療缺血再灌注損傷有明顯療效,其主要的作用機制可
能為:①清除機體氧自由基,防止鈣超載,抑制機體促炎性細(xì)胞因子
TNF-α,IL-6和IL-8等的生成和釋放,減輕炎性反應(yīng)[25];②抑制核
轉(zhuǎn)錄因子NF-KB的活性,下調(diào)炎癥因子的釋放[26];③保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞,
促進(jìn)內(nèi)皮釋放NO,擴張血管,改善微循環(huán)[27];③通過對凋亡相關(guān)基
因Bax,bcl-2和Fax等的調(diào)控及促進(jìn)HSP70的表達(dá),參與對缺血再
灌注損傷的影響[28-29].缺血再灌注損傷的病理機制非常復(fù)雜,SF在
各種研究中已經(jīng)顯示出對心,腎,腦,胃腸道等重要臟器的缺血再灌
注損傷的防治有重要的臨床意義[30-31].SF對肝臟缺血再灌注損傷也
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有成功的報導(dǎo),動物實驗顯示該藥對大鼠移植肝臟缺血再灌注損傷有
防治作用[32].其可能作用機制包括抑制枯否氏細(xì)胞激活和氧自由基產(chǎn)
生,改善微循環(huán),減少細(xì)胞凋亡.另外銀杏提取物(ginkgo biloba extract,
EGb),其主要成份為總黃酮類和銀杏內(nèi)酯,有獨特的抗氧自由基及
調(diào)整循環(huán)穩(wěn)定,改善血液循環(huán)保護(hù)組織的作用[33].已有研究EGb對
多種組織器官(心,腦,肝等)的缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用[34-36].
其它中醫(yī)中藥如丹參和承氣方劑[37]也有改善肝臟能量代謝和抗氧自
由基作用,保護(hù)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能,抑制肝細(xì)胞凋亡和防止細(xì)胞內(nèi)
鈣超載,對減輕肝臟缺血再灌注損傷有良好的作用.
5 物理療法:利用短暫的亞致死量的高溫療法,即稱為熱休克預(yù)
處理可以防止多種臟器缺血時線粒體膜完整性的破壞并有助于線粒
體在再灌注時產(chǎn)生高能磷酸化合物[38],對保護(hù)肝細(xì)胞,防止細(xì)胞凋亡
有重要的意義.Yamagami K發(fā)現(xiàn)熱休克反應(yīng)后能產(chǎn)生熱休克蛋白
HSP70,HSP70能抑制氧自由基,脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)生,增加細(xì)胞的耐
受力[39];同時熱休克反應(yīng)能促進(jìn)機體內(nèi)源性抗氧化物觸酶的產(chǎn)生[40].
另外1種物理療法即通過臭氧氧化預(yù)處理,可以提升內(nèi)源性NO濃度
和維持細(xì)胞氧化還原平衡狀態(tài)來保護(hù)肝臟,避免缺血再灌注損傷,對
日益增加的肝臟移植手術(shù)有重要的臨床意義.
6 新型免疫抑制劑的應(yīng)用:新型和高效的器官移植免疫抑制劑
FK506是1種從鏈霉素中分離出來的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素.有研究證
明,FK506可以通過抑制了NF-KB與其靶基因啟動子特異序列的結(jié)
合活性,抑制靶基因的表達(dá);同時抑制促炎因子TNF-α,IL-1,ICAM-1
等的產(chǎn)生,抑制中性粒細(xì)胞在病灶區(qū)的聚集.如Okano[41]等發(fā)現(xiàn)
FK506可增加肝臟低溫保存再灌注的血流,增加組織ATP含量.
Carcia-Criad[42]等研究證明,FK506可以減低熱缺血再灌注肝臟氧自
由基含量,抑制細(xì)胞因子的釋放和中性粒細(xì)胞的浸潤能力.而國內(nèi)趙
浩亮[43]等研究在肝臟保存液和灌注液中加入FK506,顯示用藥組ET
含量下降,ALT下降,肝細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)異常減輕.另外
FK506可以移植肝臟保存液中TNF-αmRNA的表達(dá),使TNF-α
mRNA表達(dá)減少[44-45],故此FK506是1種新型高效的預(yù)防肝臟缺血
再灌注損傷的藥物.
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7 基因治療:隨著干細(xì)胞和分子生物學(xué)的發(fā)展以及對肝臟內(nèi)皮細(xì)
胞在缺血再灌注損傷中的認(rèn)識,基因敲除技術(shù)被用于缺血再灌注損傷
的防治.其作用機理是清除有害基因,抑制內(nèi)皮細(xì)胞的活化,減輕炎
癥反應(yīng)的程度,從而減輕缺血再灌注損傷.Lehmann[46]等用腺病毒轉(zhuǎn)
載Cu/Zn-SOD基因至大鼠供肝中,行肝移植后轉(zhuǎn)基因大鼠全部存活.
而Ichihara[47]等證實人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Rb)轉(zhuǎn)基因小鼠在肝臟表達(dá)
Rb蛋白后有抗凋亡作用.也有研究[48]發(fā)現(xiàn)用CD40Ig進(jìn)行靶向基因
治療可以發(fā)揮抗氧化劑HO-1和抗凋亡Bcl-2/Bcl-X1的表達(dá),有效保
護(hù)缺血再灌注損傷的大鼠肝臟.另外1項研究[49]發(fā)現(xiàn)通過腺病毒轉(zhuǎn)染
絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶,可以阻止凋亡細(xì)胞的死亡和隨后的缺血再
灌注損傷,提高肝細(xì)胞的存活率.
8 其它治療:其它還有許多藥物正在試驗中,如鈉鉀通道拮抗劑
奎尼丁等,可以提高缺血肝臟ADP和總腺苷水平.細(xì)胞因子釋放抑
制劑可以抑制活化的Kupffer細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子,對減輕缺血再
灌注損傷有1定的效果.而潘生丁和外源性腺苷預(yù)先處理,可對肝臟
缺血再灌注損傷有良好的保護(hù)作用[50],這與誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞NO合成增
加改善肝臟血流,抑制炎癥因子合成有關(guān)[51].
3 結(jié)語
總之,關(guān)于肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生的病理生理機制復(fù)雜,有諸多
因素參與其中,形成相互制約和相互促進(jìn)的關(guān)系.但其具體的分子機
制等方面應(yīng)該進(jìn)行進(jìn)1步的研究.相信隨著干細(xì)胞,分子生物學(xué)和基
因技術(shù)等研究領(lǐng)域的新進(jìn)展,能為各種可能發(fā)生肝臟缺血再灌注損傷
患者提供了新的希望,為肝臟缺血再灌注損傷治療開辟新的途徑.
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