簡(jiǎn)析丹皮酚對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠IL - 1β、TNF - α 的影響論文
RA中，在抗原的刺激下，T淋巴細(xì)胞增多，并且使關(guān)節(jié)內(nèi)的滑膜吞噬細(xì)胞產(chǎn)生活性，一系列的免疫反應(yīng)使細(xì)胞因子明顯增多，RA受累關(guān)節(jié)炎細(xì)胞浸潤(rùn)而發(fā)生炎癥改變。TNF-α產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)損傷受累的軟骨和骨，最終形成RA病變的關(guān)節(jié)畸形。牡丹皮中含有的丹皮酚及其糖苷類物質(zhì)均有消炎的作用，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有控制作用，對(duì)心血管系統(tǒng)有防止動(dòng)脈粥樣硬化的作用，還可以利尿、防止組織潰瘍效用。先前的研究表明，丹皮酚對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎具有抑制作用，可以緩解因類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎所導(dǎo)致的肺損傷。本實(shí)驗(yàn)以先前的已知理論為基礎(chǔ)，進(jìn)一步對(duì)丹皮酚治療RA中IL-1β、TNF-α水平的影響，闡明丹皮酚治療RA的作用機(jī)制。
1材料和方法
1.1制備
大鼠AA模型在大鼠足跖注射弗氏完全佐劑(Sigma公司產(chǎn)品)，每只注射0.1mL，共15d。期間觀察大鼠后足的活動(dòng)，及未注射組的前肢活動(dòng)、體重等指標(biāo)。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥劑量
選擇實(shí)驗(yàn)大鼠共32只，不限雌雄。分4組，A組為空白對(duì)照組。B組為模型對(duì)照組，注射生理鹽水。C組為丹皮酚大劑量治療組，注射丹皮酚量為32mg/kg·d。D組為丹皮酚小劑量治療組，注射丹皮酚量為8mg/kg·d。B、C、D組分別在大鼠后肢足跖關(guān)節(jié)內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1mL/只，共15d，在造模第7天起，每日注射低劑量(8mg/kg)、高劑量丹皮酚(32mg/kg)共21d。
1.3指標(biāo)測(cè)定
1.3.1實(shí)驗(yàn)大鼠后肢足跖腫脹程度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)21d后，測(cè)量后足跖容積，并統(tǒng)計(jì)腫脹程度。標(biāo)注每組實(shí)驗(yàn)大鼠各個(gè)關(guān)節(jié)的RA病變程度，關(guān)節(jié)炎指數(shù)按5級(jí)評(píng)分法來(lái)評(píng)價(jià)。
1.3.2測(cè)定大鼠IL-1β、TNF-α每只取4～5mL血于試管中，靜置30min后，用冷凍離心機(jī)以2500r/min的速率離心15min，然后移取上清液0.3mL到凍存試管中，-20℃保存待用，應(yīng)用ELISA方法測(cè)血清中IL-1β和TNF-α的水平。實(shí)驗(yàn)均按照試劑盒說(shuō)明書仔細(xì)操作。
2結(jié)果
2.1丹皮酚對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠RA指數(shù)影響
各組經(jīng)過(guò)不同藥物處理后，模型組AI指數(shù)高于NC組(P<0.05)。給藥后，Pae低、高劑量組AI顯著低于Model組(P<0.05)。
2.2丹皮酚對(duì)大鼠IL-1β、TNF-α的影響
關(guān)節(jié)炎模型組IL-1β、TNF-α明顯高于NC組(P<0.05)。給藥后，Pae高劑量組IL-1β、TNF-α顯著低于Model組(P<0.05)，
3討論
RA是一種進(jìn)行性、多個(gè)關(guān)節(jié)受累為體現(xiàn)的免疫系統(tǒng)疾病。RA的病理表現(xiàn)主要是炎癥刺激導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜的增生、單核細(xì)胞浸入，以及在病理情況下新生血管的形成。至今，尚沒(méi)有根治RA的有效方法，更沒(méi)有有效的預(yù)防。現(xiàn)今對(duì)于RA患者，主要通過(guò)非甾體抗炎藥、激素和抗風(fēng)濕藥等治療。前期工作證實(shí)了，中藥牡丹皮中含有的丹皮酚具有抑制實(shí)驗(yàn)性、佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的作用，我們?cè)谶@個(gè)研究基礎(chǔ)上，用丹皮酚調(diào)節(jié)AA大鼠中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α進(jìn)行深入研究。在RA病患中，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)機(jī)制，并導(dǎo)致體內(nèi)炎細(xì)胞活躍已得到公認(rèn)，RA和血清中IL-1β和TNF-α的水平顯著升高相關(guān)。單核細(xì)胞以及吞噬細(xì)胞分泌的IL-1β是炎癥開始以及推動(dòng)的因素，過(guò)多分泌的IL-1β可以刺激滑液、軟骨釋放PGE2和膠原酶，促動(dòng)滑膜炎癥反應(yīng)的發(fā)生、骨基質(zhì)的崩解;另外，IL-1β還可以使嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞聚集，從而加重炎癥反應(yīng)。試驗(yàn)顯示，高劑量丹皮酚組與各組比較顯示:高劑量丹皮酚可以顯著抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1β因子的水平，所以丹皮酚可以明顯降低血清中IL-1β的水平，可以延緩RA的發(fā)生、發(fā)展。單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α可參與疾病活動(dòng)期或進(jìn)展期，在此期間TNF-α高水平表達(dá)分泌，如果TNF-α增多，提示疾病處于活動(dòng)期，疾病的嚴(yán)重程度增高。TNF-α與IL-1β很相似，其作用的靶細(xì)胞幾乎相同，刺激受累關(guān)節(jié)內(nèi)的滑膜和軟骨，促進(jìn)合成PGE2和膠原酶，從而進(jìn)一步引起骨質(zhì)和軟骨的吸收，關(guān)節(jié)內(nèi)的組織如關(guān)節(jié)軟骨、骨質(zhì)、滑膜破壞，并促進(jìn)成纖維細(xì)胞增生。TNF-α可以增加巨噬細(xì)胞自身生成，促進(jìn)IL-1β的合成。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí):高劑量丹皮酚可以明顯降低TNF-α的水平，在RA后期高劑量丹皮酚還可以控制病情的進(jìn)展，高劑量丹皮酚與RA密切相關(guān)。
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