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鏈球菌屬及其檢驗
鏈球菌屬(Streptococcus)細菌，呈鏈狀排列的革蘭陽性球菌，個別種成雙排列。以下是小編整理的鏈球菌屬及其檢驗，希望對大家有所幫助。
1、分類
鏈球菌的分類方法尚未統一。常用下列兩種方法。
�、鸥鶕苎F象：分為3類。
①甲型溶血性鏈球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周圍有1～2mm寬的草綠色溶血環，稱甲型溶血或α溶血，該類菌又稱草綠色鏈球菌，為條件致病菌。
�、谝倚腿苎枣溓蚓�(β-hemolytic streptococcus)：菌落周圍有2～4mm寬的透明溶血環，稱乙型溶血或β溶血，該類菌又稱溶血性鏈球菌，致病性強，常引起人和動物多種疾病。
�、郾玩溓蚓�(γ-streptococcus)：菌落周圍無溶血環，因而又稱不溶血性鏈球菌，一般不致病。
�、聘鶕乖Y構：按鏈球菌細胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20個群。同群鏈球菌間，因表面蛋白質抗原不同又分若干型。如A群根據其M抗原不同，可分成約100個型;B群分4個型。對人致病的鏈球菌菌株，主要是 A群，多數呈現乙型溶血。
2、細菌特性
�、沛溓蚓�
�、� 形態染色 球形或橢圓形，直徑0.5～1.0μm，鏈狀排列，鏈的長短與細菌的種類和生長環境有關，在液體培養基中形成的鏈較長。無芽胞，無鞭毛。多數菌株在培養早期(2～4h)形成透明質酸的莢膜。革蘭染色陽性。
�、诜蛛x培養 營養要求較高，培養基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、維生素等物質。多數菌株兼性厭氧，少數為專性厭氧。在液體培養基中呈沉淀生長，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圓形、凸起、光滑、直徑為0.5mm～0.75mm的細小菌落，菌落周圍出現不同類型的溶血環。
�、凵磻� 觸酶陰性、一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩特性可用來鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。
④抗原構造 主要有三種：
蛋白質抗原：或稱表面抗原。具型特異性有M、T、R、S 4種，位于C抗原外層。與致病性有關的是M抗原。
多糖抗原：或稱C抗原。為群特異性抗原，位于細胞壁。根據C抗原的不同，將鏈球菌分為20群。對人致病的90%屬A群。
核蛋白抗原：或稱P抗原。無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。
�、莸挚沽� 不強，60℃30min即被殺死。對常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環素及磺胺類敏感。
�、� 肺炎鏈球菌
�、� 形態染色 革蘭陽性球菌，菌體呈矛頭狀、成雙排列，寬端相對，尖端向外，在膿液、痰液及肺組織病變中亦可呈短鏈狀，無鞭毛，無芽胞，在機體內或含血清的培養基中可形成莢膜。
�、诜蛛x培養 營養要求高，在血平板上形成灰白色、圓形、直徑為0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周圍有草綠色溶血環。培養時間長時可產生自溶酶。
③生化反應 多數菌株分解菊糖，膽鹽溶解試驗陽性和optochin敏感試驗陽性，籍此可與草綠色鏈球菌相區別。
�、芸乖Y構
莢膜多糖抗原 可將肺炎鏈球菌分為85個血清型。肺炎鏈球菌14型與人類A血型抗原有交叉反應。
多糖抗原 為各型菌株所共有�？杀谎逯幸环NC反應蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎癥者含量增高，故常以測定CRP作為診斷的依據。
M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類似，但抗原性不同，與毒力無關。
�、莸挚沽� 本菌抵抗力弱，對一般消毒劑敏感。有莢膜菌株抗干燥力較強，在干痰中可存活1～2月。對青霉素、紅霉素、潔霉素敏感。
⑥ 變異性 有莢膜的肺炎鏈球菌經人工培養后可發生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R變異，同時隨著莢膜的消失，毒力亦隨之減弱。將R型菌落的菌株接種動物或在血清肉湯中培養，則又可恢復S型。
3、臨床意義
�、呕撔枣溓蚓�
A群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌(pyogenic streptococcus)，致病力強，占人類鏈球菌感染的90%，能產生多種外毒素和侵襲性酶，如鏈球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶、鏈道酶、透明質酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內膜炎、腦膜炎及變態反應性疾病如急性腎小球腎炎、風濕熱等，產毒株還可引起猩紅熱。鏈球菌型別多，各型間無交叉免疫，故常反復感染。
⑵乳鏈球菌
B群鏈球菌學名無乳鏈球菌(S.agalactiae)是新生兒敗血癥和腦膜炎的常見菌，對成人主要引起腎盂腎炎、子宮內膜炎等。
�、� 肺炎鏈球菌
肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)，俗稱肺炎球菌(pneumococcus)，是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌，還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎等。其莢膜在細菌的侵襲力上有重要作用，此外溶血素、神經氨酸酶是主要致病物質。感染后機體可產生牢固的型特異性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。
�、� 草綠色鏈球菌
草綠色鏈球菌亦稱甲型溶血性鏈球菌。是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亞急性細菌性心內膜炎。
4、微生物學檢驗
�、艠吮静杉� 根據不同疾病采集不同標本。
�、茩z驗方法
顯微鏡檢查 標本涂片革蘭染色，鏡檢見鏈狀排列革蘭陽性球菌可初報。
分離培養 血液標本先增菌培養，膿液、咽拭可接種血瓊脂平板并涂片染色鏡檢，初代分離需5%C02，35℃24h觀察菌落性狀。
�、品窝祖溓蚓�
�、贆z驗程序
②標本采集 根據病變部位采集不同標本。
③檢驗方法
顯微鏡檢查： 除血液外，痰、膿液等均可直接涂片染色鏡檢。如發現革蘭陽性矛頭狀雙球菌，周圍有較寬的透明區，經莢膜染色確認后可初報“找到肺炎鏈球菌”。
分離培養：血液、腦脊液先增菌，可呈均勻混濁，有綠色熒光。痰液、膿液可直接接種血平板，5%～10%CO2培養后，取可疑菌落進一步作optochin敏感實驗、膽鹽溶菌試驗與菊糖發酵試驗，以區別于甲型鏈球菌。
動物試驗：小鼠對肺炎鏈球菌敏感，12～36h死亡。
莢膜腫脹試驗：如遇同型免疫血清，則肺炎鏈球菌莢膜出現腫脹，為陽性。
④鑒定與鑒別
�、貺ancefield群特異性抗原鑒定：B群為無乳鏈球菌，F群為米勒鏈球菌，A、C、G群抗原不是種特異性抗原，還需根據菌落大小和生化反應進一步鑒定。
�、赑YR試驗：化膿性鏈球菌為陽性。
③桿菌肽(bacitracin)敏感試驗：化膿性鏈球菌為陽性，有別于其他PYR陽性的β溶血性細菌(豬鏈球菌、海豚鏈球菌)和A群小菌落β溶血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。此法可作為篩選試驗。
④VP試驗：可鑒別A、C、G群β溶血的大、小兩種不同菌落。
⑤CAMP試驗：無乳鏈球菌能產生CAMP因子，它可促進金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產生顯著的協同溶血作用。試驗時先將金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直徑劃線接種，再沿該線垂直方向接種無乳鏈球菌，兩線不得相接，間隔約3～4mm。35℃孵育過夜，兩種劃線交界處出現箭頭狀溶血，即為陽性反應。本法可作為無乳鏈球菌的初步鑒定試驗。
性狀
形態與染色
革蘭染色陽性，菌體呈球形或卵圓形，直徑0.6~1. 0μm，呈鏈狀排列。臨床標本及固體培養基中以短鏈或成對多見，液體培養基中呈長鏈。無芽胞，無鞭毛，但有菌毛樣結構，多數菌株在培養早期可形成莢膜，隨著培養時間的延長而消失。衰老、死亡或被吞噬細胞吞噬后革蘭染色可呈陰性。
培養特性與生化反應
需氧或兼性厭氧。營養要求較高，在含血液、血清、葡萄糖的培養基中才能生長。最適生長溫度為35℃，最適pH為7.4~7.6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀沉淀。在血瓊脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、邊緣整齊、直徑0.5~0. 75 mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血現象。
鏈球菌不產生觸酶，可與葡萄球菌相區別。鏈球菌不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩個特性常被用來鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。
抗原構造
鏈球菌的抗原構造復雜，主要有3種：
�、俸说鞍卓乖ㄓ址QP抗原）：無種特異性，各種鏈球菌均相同，可與葡萄球菌有交叉反應。
�、诙嗵强乖ㄓ址QC抗原）：是細胞壁的多糖成分，有群特異性，是鏈球菌分群的依據。
③蛋白質抗原（又稱表面抗原）：細胞壁外的菌毛樣結構含M蛋白，位于C抗原外層，具有型特異性。M蛋白是化膿性鏈球菌的一種重要毒力因子，具有抗吞噬作用并與致病性有關。
抵抗力
鏈球菌抵抗力不強，60℃ 30分鐘即被殺死，在干燥塵埃中可生存數月，對一般消毒劑敏感。乙型溶血性鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環素、桿菌肽及磺胺類藥物等敏感。
致病性
A群鏈球菌
A群鏈球菌也稱為化膿性鏈球菌，是人類鏈球菌感染最常見病原菌之一。
1．致病物質A群鏈球菌有較強的侵襲力，除胞壁成分外，可產生多種外毒素和胞外酶。
(1)M蛋白 是A群鏈球菌的主要致病因子，含M蛋白鏈球菌具有抗吞噬和抵抗吞噬細胞內殺菌作用的能力。此外，M蛋白與心肌、腎小球基底膜有共同抗原，能刺激機體產生相應抗體，引起交叉反應，損害人類心血管等組織。在某些條件下，M蛋白與相應抗體形成的免疫復合物可引起急性腎小球腎炎等超敏反應。
(2)鏈球菌溶血素由乙型溶血性鏈球菌產生，有兩種類型：
�、冁溓蚓苎豋(Streptolysin O，SLO)：是一種含- SH基的蛋白質，對氧敏感，遇氧時- SH被氧化成- ss -基，失去溶血活性，若加入還原劑即可恢復溶血作用。SLO免疫原性強，鏈球菌感染后2-3周至病愈后數月到一年內，85%~90%的患者血液中可出現抗SLO的抗體，風濕熱尤其是活動期患者該抗體顯著升高，其效價在1：400以上，可作為鏈球菌新近感染的重要參考指標。
�、阪溓蚓苎豐( streptolysin S，SLS)：鏈球菌在血瓊脂平板上菌落周圍的B溶血環即SLS所致。SLS是小分子糖肽，無免疫原性，對氧不敏感。SLS對白細胞和多種組織細胞有破壞作用。
(3)致熱外毒素(pyrogenic exotoxin) 又稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質，致熱外毒素抗原性強，具有超抗原作用，對兔有致熱性和致死性。
(4)侵襲性酶類 A群鏈球菌可產生多種侵襲性酶，均是擴散因子，主要有三種。
�、偻该髻|酸酶(hyaluromidase)：能分解細胞間質的透明質酸，使細菌易在組織中擴散。
�、阪溂っ福�( strepto - kinase，SK)：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，與葡激酶相似，能使血漿中的纖維蛋白酶原轉化成纖維蛋白酶，可溶解血塊或阻止血漿凝固，有利于細菌在組織中擴散。③鏈道酶( streptodomase，SD)：又稱鏈球菌DNA酶。主要由A、C、G群鏈球菌產生。能分解膿液中高度黏稠的DNA，使膿液稀薄，促進細菌擴散。
2．所致疾病鏈球菌可引起人類多種疾患。A群鏈球菌引起的疾病約占人類鏈球菌感染 的90%。感染來源是患者和帶菌者。感染方式途徑可通過空氣飛沫傳播，亦可經皮膚傷口感染。
(1)化膿性炎癥主要有淋巴管炎、淋巴結炎、蜂窩織炎、癰、膿皰瘡等局部皮膚和皮下組織感染，還可引起扁桃體炎、咽炎、咽峽炎、鼻竇炎、產褥感染、中耳炎、乳突炎等及其他系統的感染。
(2)超敏反應性疾病主要有急性腎小球腎炎和風濕熱等。
(3)中毒性疾病鏈球菌毒素休克綜合征、猩紅熱等。
3．免疫性A群鏈球菌感染后，機體產生多種抗體，同型鏈球菌可使機體獲得特異性免疫力。鏈球菌型別較多，各型之間無交叉免疫力，所以機體可反復感染�；夹杉t熱后可產生同型的致熱外毒素抗體，能建立牢固的同型抗毒素免疫。
肺炎鏈球菌
肺炎鏈球菌屬鏈球菌屬。廣泛分布于自然界，經常寄居于正常人的鼻咽腔中，多數不致病，少數引起大葉性肺炎等疾病。
1．抗原結構與分型
�、偾v膜多糖抗原：存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據抗原不同，肺炎鏈球菌可分為90多個血清型，其中有20多個血清型可引起疾病。
�、贑多糖抗原：存在于肺炎鏈球菌細胞壁中，在鈣離子存在時，可與血清中一種C反應蛋白(Creartion protein，CRP)結合，故常用肺炎鏈球菌C多糖來測定C反應蛋白，輔助診斷活動性風濕熱及急性炎癥性疾病。
2．致病物質本菌的致病物質主要是莢膜莢膜有抗吞噬作用，失去莢膜，細菌就失去致病力。此外，肺炎鏈球菌溶血素O、脂磷壁酸、神經氨酸酶是肺炎鏈球菌較重要的致病物質。
3．所致疾病該菌寄生在正常人的口腔及鼻咽腔，一般不致病，當機體免疫力下降時才致病。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎，其次是支氣管炎肺炎后可繼發膿胸、胸膜炎，也可引起乳突炎、中耳炎、敗血癥和腦膜炎等。
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