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檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：雜交瘤技術(shù)
雜交瘤技術(shù)是指兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。他可使兩個(gè)不同來源的細(xì)胞核在同一細(xì)胞中表達(dá)功能。下面是小編為大家收集的檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：雜交瘤技術(shù)，僅供參考，大家一起來看看吧。
檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：雜交瘤技術(shù)
雜交瘤技術(shù)的基本原理是用分泌抗體但不能長期培養(yǎng)的B細(xì)胞與能在體外長期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交。篩選得到的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)該是既能分泌抗體又有瘤細(xì)胞的特性，可長期傳代培養(yǎng)，又可在液氮中保存的細(xì)胞。把這些細(xì)胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行單克隆抗體的生產(chǎn)。
原理：最常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復(fù)雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細(xì)胞和它的骨髓瘤細(xì)胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細(xì)胞。B細(xì)胞是從免疫動(dòng)物的脾臟中分離出來的。動(dòng)物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進(jìn)行一次靜脈加強(qiáng)注射以保證得到的B細(xì)胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細(xì)胞有許多細(xì)胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標(biāo)準(zhǔn)是
①瘤細(xì)胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；
②是次黃嘌呤鳥嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型。因?yàn)檫@種缺陷型的瘤細(xì)胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟(aminopterin)阻斷后，由于缺失這些酶，即使補(bǔ)充它的底物次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)，核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結(jié)果導(dǎo)致瘤細(xì)胞死亡(圖7—2)。而雜交瘤細(xì)胞因帶有B細(xì)胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA.所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細(xì)胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行選擇的原理。
產(chǎn)生背景
科勒和米爾斯廷于1975年發(fā)明了淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，終于使制備純一抗體的難題獲得了解決。雜交瘤技術(shù)是由細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展而來。抗體是由免疫的B淋巴細(xì)胞分泌的球蛋白，各個(gè)淋巴細(xì)胞分泌的抗體各不相同。因而，要獲得一種純一的抗體只有從一個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞群制取。然而，B淋巴細(xì)胞在體外不能長期存活，分裂2、3次即要死亡，因而無法得到由一個(gè)淋巴細(xì)胞的后代細(xì)胞群(克隆)分泌的大量抗體。骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下具有無限繁衍的特性。免疫B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。這種雜交細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能象B淋巴細(xì)胞一樣分泌抗體，又能象骨髓瘤細(xì)胞一樣無限增殖，從而成了分泌抗體的“永生細(xì)胞”。科勒和米爾斯廷基于這一原理，成功地發(fā)明了雜交瘤技術(shù)。
應(yīng)用
單克隆抗體不僅在生物學(xué)和免疫學(xué)基礎(chǔ)研究中具有重要的價(jià)值，而且在實(shí)踐中的應(yīng)用范圍亦極為廣泛。在醫(yī)學(xué)中，單克隆抗體已用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)是診斷準(zhǔn)確，無交叉反應(yīng)。例如，單克隆抗體診斷乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒，則很少發(fā)生假陰性的漏診。單克隆抗體還可作為治療疾病的藥物載體。單克隆抗體對(duì)靶組織有專一親和性，故在體內(nèi)有特異定位分布的特點(diǎn)。把抗腫瘤藥物和抗某種腫瘤的單克隆抗體結(jié)合，則可使藥物在體內(nèi)有選擇地集中向該腫瘤細(xì)胞攻擊，只殺滅靶細(xì)胞，而不損傷正常組織，大大減輕了抗癌藥物的副作用。因此，載藥單克隆抗體有“生物導(dǎo)彈”之稱。制做的單克隆抗體多為鼠——鼠型，對(duì)人來說屬異種蛋白質(zhì)，因此難于用于治療。為了解決人體對(duì)異種單克隆抗體蛋白的排異作用，學(xué)者們正努力研制人——人型單克隆抗體，以利于大量應(yīng)用于治療疾病。
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