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衛(wèi)生資格考點(diǎn)：高效液相色譜(HPLC)法
高效液相色譜以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過程。通常所說的柱層析、薄層層析或紙層析就是經(jīng)典的液相色譜。所用的固定相為大于100um 的吸附劑( 硅膠、氧化鋁等)。這種傳統(tǒng)的液相色譜所用的固定相粒度大，傳質(zhì)擴(kuò)散慢，因而柱效低，分離能力差，只能進(jìn)行簡單混合物的分離。而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、傳質(zhì)快、柱效高。
自20世紀(jì)90年代以來，用于對映體純度測定的液相色譜方法的開發(fā)，在手性化合物的分析中可能是最重要的發(fā)展。
用GC分析非對映體混合物是一種有效的方法。然而，它僅限于揮發(fā)性的和對熱穩(wěn)定的化合物。因此在制藥行業(yè)中更常用的是手性固定相(CSP)或在少數(shù)情況下手性移動(dòng)相(CMP)的HPLC。
高效液相色譜的手性固定相法是指在色譜擔(dān)體上涂漬(或化學(xué)鍵合)一種能拆分對映體的手性選擇劑(又稱手性拆分劑)，利用這種手性選擇劑與兩個(gè)對映體之間的作用能力的差異而使這對對映體在色譜體系中被分離。按照手性拆分劑的不同，高效液相色譜的手性固定相可以分為六類。
① 多糖聚合物型(如衍生化的纖維素、直鏈淀粉等)。
② 蛋白質(zhì)親和型(如a1酸性糖蛋白，纖維水解酶等)
③ 高分子手性聚合物型(如網(wǎng)絡(luò)狀的Kromloo-5CHI-TBB等)。
④ 手性空穴型(如衍生化的β-環(huán)糊精等)。
⑤ 配位體交換型(如SumichiralOA-5000等)。
⑥ Pirkle型(如在硅膠上鍵合N-3,5-二硝基苯甲酰苯甘氨酸等)。
使用這類手性固定相時(shí)，對映體分子上取代基的性質(zhì)和取代基位置均會(huì)對拆分結(jié)果帶來明顯的影響。
在這些手性固定相上的拆分機(jī)理目前尚未完全明了，多數(shù)人認(rèn)為手性固定相的拆分劑與對映體分子之間п-п作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用以及空間立體位阻效應(yīng)是支配手性拆分的主要原因。
已有幾本書對手性液相色譜體系、對映體分離技術(shù)及其實(shí)際應(yīng)用的評(píng)價(jià)做出完整的綜述。目前間歇式是主要的分離方式。其特征是樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)后，必須完全流出色譜柱后才能進(jìn)行下一次的分離，所以進(jìn)樣是間歇的。值得―提的是，除了對各種光學(xué)及立體異構(gòu)體的分離外，在天然藥物、生物技術(shù)生產(chǎn)的生物藥品的分離純化上，HPLC正發(fā)揮著其他技術(shù)無法比擬的作用，已有公斤級(jí)到噸級(jí)的工業(yè)化制備規(guī)模HPLC(這包括另一種類同HPLC，加上電腦控制等稱為擬移動(dòng)質(zhì)色譜)，從原料的投入到雜質(zhì)與純晶的分離、收集、溶劑的回收全部自動(dòng)化，而且?guī)缀踹_(dá)到了零排放的標(biāo)準(zhǔn)。
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